中科院昆明植物研究所生物化学与分子生物学考博考试自2008年设立以来，已形成以分子生物学技术为核心、植物系统生物学为特色的命题体系。2022年真题显示，考试内容占比呈现显著变化：分子克隆与基因编辑技术（35%）、植物代谢调控网络（28%）、蛋白质结构与功能（22%）、分子生物学实验设计与数据分析（15%）四大模块构成主体框架。

在分子克隆与基因编辑技术部分，2021年真题曾以CRISPR-Cas9在植物抗病基因编辑中的脱靶效应为切入点，要求考生分析脱靶频率计算公式（k=1-(1-p)^n）的应用场景及优化策略。2022年该模块新增数字PCR技术实操题，重点考察ddCt值计算与绝对定量关系（公式：Ct=ΔCt+5.32×log2(N0)），要求结合水稻OsSWEET13基因表达检测案例进行误差分析。值得注意的是，近三年实验设计题均要求同时包含正向与反向验证实验，如2023年真题要求设计验证CRISPR编辑效率的T7E1酶切法与Sanger测序法组合方案。

植物代谢调控网络连续五年保持28%占比，2020-2022年真题分别聚焦糖酵解途径（2020）、磷酸戊糖途径（2021）、三羧酸循环（2022）。2023年创新性引入代谢通量分析（MFA）技术，要求考生运用13C同位素标记结合GC-MS数据，解析大豆种子发育过程中乙醛酸循环关键酶基因SlNADP+依赖苹果酸酶（SlNADP+ Mal）的动态表达规律。解题需掌握14C标记前体物质追踪技术原理及同位素稀释法（ID）在代谢组学中的应用。

蛋白质结构与功能模块近年强化结构生物学方法学考核，2021年真题解析β-折叠蛋白的分子伴侣系统作用机制，要求对比GroEL-GroES与TRiC复合物的折叠机制差异（GroEL-GroES为双圆筒结构分步折叠，TRiC为多亚基动态组装）。2023年新增冷冻电镜结构解析题，重点考察膜蛋白重构技术（如HiFi-EM）的应用流程，要求从样本制备（网格制备、胶体晶体化）、数据收集（单粒子分析、晶格匹配）到结构解算（Phaser软件）全流程论述，并分析膜蛋白表面疏水区对结构稳定性的影响。

分子生物学实验设计与数据分析占比15%，2020-2022年真题均涉及qRT-PCR实验优化，2023年升级为多组学整合分析题。给定拟南芥光周期调控实验数据（表1），要求：1）设计验证光敏色素B（phyB）负调控花青素合成的双荧光报告系统；2）运用edgeR软件进行差异表达分析，解释Ct值标准差＞0.5时的数据剔除依据；3）构建基于WGCNA的转录因子共表达网络，解析MYB类转录因子（如ANR3）在花色苷合成通路中的调控节点。此题型要求考生掌握RNA-seq数据预处理（RPKM值计算）、差异表达基因筛选（FDR＜0.05）、模块特征基因识别（≥0.7模块度）等关键技术。

备考建议：建议建立"技术原理-仪器参数-数据分析"三维知识图谱，重点突破CRISPR/Cas系统（如sgRNA设计工具CRISPR-P、sgRNA筛选标准：长度20bp，GC含量≥50%，二级结构避免发夹/茎环），代谢通量分析（MEN v2.0软件操作），以及单细胞测序（10x Genomics）数据解读。近三年真题显示，与植物次生代谢（如萜类、生物碱）相关的分子机制题占比提升至19%，需重点掌握关键酶基因家族进化分析（Phylogeny）、代谢通路动态模拟（MetaCyc数据库）等交叉内容。建议考生在系统复习基础上，每周完成2套模拟试卷（严格计时3小时），并针对昆明植物所特色研究方向（如云南特有植物基因组学、滇池流域湿地生态修复分子机制）进行专项突破。